В настоящее время известно огромное количество всевозможных инфекционных заболеваний человека. Возбудители этих заболеваний настолько быстро эволюционируют и легко приспосабливаются к изменяющимся условиям среды, что диагностировать их становится все сложнее. Именно поэтому, наряду с традиционными морфологическими, иммунологическими и биохимическими методами сегодня применяют новые технологии в диагностике инфекционных заболеваний для получения более точных результатов. В последние десятилетия в клинической диагностике инфекционных заболеваний все более широкое применение находят молекулярно-биологические методы исследования, задачей которых является как можно более раннее выявление заболевания и осуществление мониторинга эффективности проводимой терапии.

Одним из таких самых современных методов молекулярной биологии является полимеразная цепная реакция (ПЦР). Особое значение данный метод имеет в случае труднокультивируемых, медленнорастущих или некультивруемых микроорганизмов.

Что такое ПЦР?

Полимеразная цепная реакция позволяет непосредственно обнаруживать ДНК или РНК инфекционного агента в клиническом материале. Это “золотой стандарт” в медицинской инфекционной диагностике. Данный метод широко применяется в клинической практике для диагностики вирусных гепатитов, возбудителей герпетической группы инфекций, многих урогенитальных инфекций, SARS –CоV-2 и др. Тесты ПЦР играют решающую роль в предотвращении распространения заболеваний, так как часто позволяют выявить инфекции на ранней стадии, еще до появления симптомов.

Важное значение ПЦР-анализ имеет для мониторинга и оценки эффективности терапии, особенно при вирусных заболеваниях. Определение “вирусной нагрузки”, т.е. количества вирусных частиц в крови позволяет осуществить индивидуальный подбор дозы противовирусных препаратов.

Метод ПЦР основан на обнаружении в биологическом материале небольшого фрагмента ДНК возбудителя той инфекции, которую подозревает врач. «Небольшой фрагмент ДНК» — это несколько сотен пар оснований ДНК — кирпичиков, расположенных в строго определенной последовательности, и потому образующих неповторимый узор.

При проведении ПЦР-анализа ведется поиск такого фрагмента ДНК инфекции, который специфичен только для данного микроорганизма. Это значит, что этот фрагмент ДНК «особенный» — он встречается только у этого инфекционного агента (или группы родственных агентов), но не встречается ни у одного другого возбудителя заболевания.

Сама полимеразная цепная реакция используется для того, чтобы найденный фрагмент размножить (копировать) и «увидеть» эти фрагменты ДНК к окончанию реакции. Основным достоинством метода ПЦР является чрезвычайно высокая чувствительность анализа–возможности, заложенные в методе ПЦР, позволяют, с одной стороны, достигать максимальной специфичности анализа, т. е. отсутствия перекрестных реакций и способности выявлять ДНК конкретного инфекционного агента в присутствии ДНК других микроорганизмов и ДНК организма-хозяина, а также проводить генотипирование.

Другим достоинством метода является то, что для ПЦР-диагностики практически всех инфекционных заболеваний, может быть использован один набор оборудования, универсальные процедуры подготовки пробы и постановки анализа, а также незначительно отличающиеся наборы реактивов.

История открытия метода ПЦР

ПЦР тесты используются в медицинской диагностике уже более 40 лет.

Первоначально сам принцип метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) был разработан Кэри Мюллисом в 1983г. Открытие ПЦР стало одним из наиболее выдающихся событий в области молекулярной биологии, и за разработку ПЦР-анализа Кэрри Мюллис был удостоен Нобелевской премии в области химии.

Широта Исследуемого клинического материала

В качестве образца при полимеразной цепной реакции может быть использован не только биологический материал от больного, но также и многие другие субстраты, в которых могут быть идентифицированы молекулы ДНК с высокой чувствительностью, например, вода, почва, продукты питания, микроорганизмы, смывы и многое другое.

Как правильно подготовиться к ПЦР-анализу.

Достоверность результатов лабораторной диагностики ПЦР зависит не только от опыта и профессионализма врача лабораторной диагностики, возможностей данной лаборатории, но и от того, соблюдал ли пациент рекомендации врача, насколько правильной была его подготовка к проведению анализа.

Наиболее простой и в то же время эффективной мерой служит соблюдение правил сдачи биологического материала:

• Кровь сдается натощак.

• Моча (первая порция) собирается утром после сна.

Доставка в лабораторию осуществляется в тот же день в течение 2–3 часов.

Соскоб для диагностики урогенитальных инфекций:

• В течение 24 часов перед исследованием не следует проводить спринцевание, внутривагинальную терапию (свечи, тампоны), не использовать антисептические средства, исключить половой контакт.

• Соскоб из уретры для мужчин: перед исследованием воздержаться от мочеиспускания в течение 2–3 часов.

Для повышения достоверности результатов, анализы желательно сдавать не менее чем через 10-14 дней после последнего приема лекарственных препаратов.

• Для диагностики SARS –CоV-2 берут мазок из ротоглотки. Сдавать его нужно натощак. С момента последнего приема пищи должно пройти минимум 3 часа, в это время пить можно только воду.

ПЦР-диагностика внесла огромный вклад в борьбу с вирусом SARS –CоV-2.

Тесты ПЦР определяют: инфицирован ли пациент в настоящее время вирусом SARS –CоV-2 и, следовательно, заразен ли он. Обнаружение вирусной РНК с помощью ПЦР позволяет обеспечить диагностику Covid -19 на ранней стадии – до того, как организм выработал ответ в виде антител или даже до того, как у человека появятся симптомы заболевания.

Метод ПЦР имеет огромное значение в медицинской практике. И сегодня трудно представить работу в области молекулярной биологии без его использования. С использованием ПЦР был совершен рывок в диагностике широкого спектра инфекционных заболеваний. Метод стал неотьемлемой частью каждодневных лабораторных исследований, продолжая при этом совершенствоваться и развиваться.

Врач клинической лабораторной диагностики
Марушкевич Г.И.